Ziółkowski-Krupa

Cross match, inaczej nazywany testem mikrocytotoksycznym, to procedura diagnostyczna mająca na celu sprawdzenie obecności przeciwciał w krwi kobiety, które mogą zwalczać limfocyty jej partnera. Jego obecność w diagnostyce par borykających się z problemami rozrodczymi jest niezastąpiona, ponieważ powszechnie stanowi przyczynę nawracających poronień.  Ponadto, wartość diagnostyczną testu podwyższa jego wykorzystanie w ocenie efektywności przeprowadzanej immunoterapii u par z rozpoznaną niepłodnością immunologiczną już poddanych leczeniu.

Test polega na przeprowadzeniu próby krzyżowej z użyciem limfocytów mężczyzny i surowicy krwi jego partnerki. Charakteryzuje się on wysoką czułością i precyzją w działaniu, a do jego wykonania potrzebna jest jedynie próbka krwi od obu partnerów. Zaleca się go także przeprowadzać równocześnie z analizą poziomu przeciwciał blokujących, znanymi jako allo-MLR — również bazujących na badaniu krwi.

Test ten jest zalecany głównie parom mającym problemy z poczęciem lub zmagającym się z nawracającymi poronieniami, jak również przed procedurą zapłodnienia in vitro, aby sprawdzić przyczyny niepłodności związane z układem odpornościowym.

Przeprowadzenie badania Cross Match jest konieczne dla obojga partnerów. Aby przeprowadzić analizę, wymagane są próbki krwi pobrane zarówno od kobiety, jak i od mężczyzny. Bez obecności obu próbek nie będzie możliwe przeprowadzenie badania.

Innymi sytuacjami sugerującymi potrzebę wykonania testu są podejrzenie chorób autoimmunologicznych, ocena zgodności tkankowej przed przeszczepem czy kontrola stanu zdrowia pacjentów po przeszczepie.

Przed badaniem nie jest wymagane specjalne przygotowanie, można spożywać posiłki. Jednakże zaleca się unikać alkoholu, intensywnego wysiłku, stresu, oraz dbać o dietę, nawodnienie i sen przez kilka dni przed testem. Ponadto, istotne jest konsultowanie z lekarzem przyjmowania leków i suplementów, które mogą zakłócić wynik badania, szczególnie tych o właściwościach immunosupresyjnych czy antyhistaminowych.

Wartości referencyjne dla tego badania różnią się w zależności od laboratorium i metody, jednakże standardowo wynik negatywny (0% lub poniżej) jest normą, sugerującą brak przeciwciał reagujących z limfocytami partnera, co jest pozytywnym znakiem dla zapłodnienia czy przeszczepu.

W przypadku poziomu dodatniego lub przekraczającego 0%, stwierdza się obecność przeciwciał wiążących się z limfocytami partnera w surowicy krwi kobiety. Jest to sytuacja niekorzystna, ponieważ może utrudniać proces zapłodnienia lub prowadzić do poronienia bądź odrzutu przeszczepu.

Wynik badania cross match należy interpretować w kontekście innych badań i objawów klinicznych pacjenta. Wynik dodatni może być spowodowany przez inne czynniki niż niezgodność immunologiczna partnerów, takie jak:

• niedokładność techniczna badania
• obecność innych przeciwciał niż anty-HLA
• obecność czynników reumatoidalnych
• obecność wirusów lub bakterii
• obecność komórek nowotworowych
• obecność krwinek czerwonych lub płytek krwi w próbce
• obecność leków lub suplementów diety wpływających na wynik

Dlatego wynik dodatni badania Cross Match wymaga potwierdzenia innymi metodami i konsultacji z lekarzem specjalistą. W niektórych przypadkach może być konieczne podjęcie leczenia immunoterapią, która ma na celu zmniejszenie aktywności układu odpornościowego kobiety wobec komórek partnera. Leczenie to polega na podawaniu kobiety limfocytów jej partnera drogą domięśniową lub dożylną.

Dodatkowe badania, które mogą bezpośrednio współdziałać z badaniem cross match obejmują analizę przeciwciał blokujących (allo-MLR) oraz badania poziomu przeciwciał anty-HLA i typowania HLA, pomocnych w diagnozie niepłodności i chorób autoimmunologicznych.

Test genetyczny KIR (ang. killer cell immunoglobulin – like receptors) służy do oceny ryzyka immunologicznej reakcji odrzucenia zarodka przez organizm matki.

Komórki NK macicy (uNK) posiadają dwa typy istotnych w tym kontekście receptorów KIR: aktywujące, które są potrzebne do prawidłowego rozwoju łożyska, oraz hamujące, mogące odrzucić cząsteczki zarodka rozpoznając je jako zagrożenie. Dla utrzymania ciąży kluczowe jest utrzymanie równowagi działania obu typów receptorów. Przy zaburzeniu tej równowagi mogą wystąpić komplikacje w trakcie ciąży, a także problemy z jej utrzymaniem.

W trakcie ciąży, matczyny układ immunologiczny identyfikuje zarodek jako półallogeniczny, rozpoznając obce antygeny pochodzące od ojca. Tolerancja immunologiczna wobec tej częściowo obcej tkanki jest niezbędna dla powodzenia ciąży. Test KIR jest narzędziem służącym do oszacowania ryzyka jej odrzucenia.

Analiza KIR jest szczególnie zalecana w przypadkach:

• Nawracających poronień – wykonanie testu sugerowane jest dla osób z historią wielokrotnych poronień.
• Długotrwałe trudności z zajściem w ciążę – badanie KIR może wspomóc wykrycie przyczyn immunologicznych problemów z poczęciem.
• Nieudane próby implantacji w procedurach IVF – pomaga zrozumieć, czy problemy z utrzymaniem ciąży mogą wynikać z nieodpowiednich interakcji immunologicznych między matką a zarodkiem.

Test KIR przeprowadza się z krwi obwodowej i nie wymaga od pacjenta specjalnych środków przygotowawczych, w tym bycia na czczo. Osoby po transfuzji krwi powinny poczekać 3 miesiące od przetoczenia, zanim przystąpią do badania.

Wyniki badania KIR są indywidualne dla każdej osoby i mogą być pomocne w diagnostyce przyczyn niepłodności, szczególnie u osób podejrzewanych o niepłodność immunologiczną. Interpretację wyniku badania należy przeprowadzić z lekarzem prowadzącym. Dla pełnego obrazu zaleca się jednoczesne wykonanie testu HLA-C.

W interpretacji wyniki badania KIR kluczowa jest identyfikacja obecności receptorów KIR hamujących oraz aktywujących na komórkach NK. Zbilansowane działanie obu typów receptorów jest normalne, natomiast wykrycie dysproporcji może wskazywać na możliwy atak układu immunologicznego na komórki organizmu — fakt mogący komplikować poczęcie i rozwijanie ciąży.

Badanie KIR często realizowane jest razem z analizą HLA-C, ponieważ interakcje pomiędzy receptorami KIR komórek NK matki a molekułami HLA-C na zarodku są kluczowe dla procesu implantacji w wczesnym etapie ciąży.

Innym powiązanym testem jest mikrocytotoksyczny (cross match), oceniający kompatybilność immunologiczną między dawcą a biorcą, często stosowany w kontekście przeszczepień.

Badanie AMH (ang. Anti-Müllerian Hormone) to test służący do pomiaru poziomu hormonu antymüllerowskiego we krwi. AMH jest białkiem wytwarzanym przez komórki ziarniste otaczające każdy dojrzewający pęcherzyk jajnikowy, a jego poziom odzwierciedla rezerwę jajnikową kobiety, czyli ogólną liczbę dostępnych pęcherzyków jajnikowych zdolnych do dojrzewania i owulacji.

AMH jest również produkowany przez mężczyzn – a konkretnie przez komórki Sertoliego znajdujące się w jądrach – i pełni ważną rolę podczas rozwoju płciowego przed urodzeniem. AMH odpowiada za regresję przewodów Müllera, które są strukturami anatomicznymi dającymi początek żeńskiemu układowi rozrodczemu, co jest kluczowe dla prawidłowego rozwoju męskich narządów płciowych.

W przeciwieństwie do kobiet, u których poziom AMH jest wykorzystywany głównie do oceny rezerwy jajnikowej, u mężczyzn jego zastosowanie jest różne.

Badanie poziomu AMH ma szereg wskazań, przede wszystkim w obszarze oceny płodności:

• Ocena rezerwy jajnikowej u kobiet planujących ciążę, szczególnie po 30. roku życia.
• Diagnoza przedwczesnego wygasania funkcji jajników.
• Ocena odpowiedzi na stymulację jajników w leczeniu niepłodności metodami wspomaganego rozrodu (np. IVF).
• Diagnostyka skuteczności leczenia endometriozy.
• Ocenie funkcji jajników u pacjentek po chemioterapii lub radioterapii.
• Diagnostyka zaburzeń rozwoju płciowych, w tym zespołu policystycznych jajników (PCOS).

Wskazania do pomiaru AMH u mężczyzn:

• Diagnostyka zaburzeń rozwoju płciowego - u dzieci z niejasnymi objawami różnicowania płci sprawdzenie poziomu AMH może pomóc w potwierdzeniu obecności lub braku funkcjonalnej tkanki jądra.
• Klinefelter's syndrome - wysokie poziomy AMH u młodych chłopców mogą wskazywać na tę chorobę.
• Po zabiegach onkologicznych - jako wskaźnik zachowania funkcji jądrowej, na przykład po chemioterapii.
• Monitorowanie funkcjonowania jąder - u przeszczepionych jąder oraz w określaniu skuteczności terapii hormonalnej.

Na poziom AMH nie wpływa cykl miesiączkowy, dlatego badanie może być wykonane w dowolnym dniu cyklu. Ponieważ poziom hormonu nie ulega dużym wahań w ciągu cyklu, nie ma specjalnych wymogów dotyczących przygotowania się do badania. Pacjentka powinna jedynie dostosować się do ogólnych zaleceń przed pobraniem krwi, np. unikać dużego wysiłku fizycznego i stresujących sytuacji.

Normy poziomu AMH różnią się w zależności od laboratorium, techniki pomiaru i grupy wiekowej, dlatego zawsze należy interpretować wyniki w odniesieniu do wartości podanych przez dane laboratorium.

Typowe wartości dla kobiet:

• 20 – 24 lat 1,52 – 9,95 ng/ml
• 25 – 29 lat 1,20 – 9,05 ng/ml
• 30 – 34 lat 0,711 – 7,59 ng/ml
• 35 – 39 lat 0,405 – 6,96 ng/ml
• 40 – 44 lat 0,059 – 4,44 ng/ml
• 45 – 50 lat 0,01 – 1,79 ng/ml

Wartości dla mężczyzn:

• 1,43 – 11,6 ng/ml

Niskie wartości AMH mogą wskazywać na obniżoną rezerwę jajnikową i mniejszą odpowiedź na stymulację hormonalną w przypadku zabiegów wspomaganego rozrodu.

Wysokie wartości mogą być związane z PCOS, gdzie występuje wiele małych pęcherzyków jajnikowych. Interpretacja wyniku powinna uwzględniać wiek kobiety, jej historię płodności i inne czynniki kliniczne.

Obniżone wartości AMH u mężczyzn mogą sugerować zmniejszoną funkcję jądrową lub nieprawidłowy rozwój jąder. Niski poziom AMH u chłopców w okresie dojrzewania lub u mężczyzn może także wskazywać na pierwotny hipogonadyzm.

Podwyższone wartości AMH u chłopców mogą być fizjologiczne, ale utrzymujące się wysokie poziomy mogą wskazywać na zaburzenia, takie jak opóźniony dojrzewanie płciowe lub Klinefeltera.

Oprócz AMH, w diagnostyce rezerwy jajnikowej oraz płodności mogą być wykorzystane następujące badania:

• Ocena poziomu Folikulotropiny (FSH) – zwłaszcza 3. dnia cyklu.
• Ocena poziomu Estradiolu (E2) – również w początkowej fazie cyklu.
• Ocena ilości antralnych (dominujących) pęcherzyków jajnikowych za pomocą ultrasonografii (USG).
• Badanie poziomu Luteinizującej Hormonu (LH) oraz Prolaktyny (PRL).

17-hydroksyprogesteron (17-OHP) to hormon steroidowy, który stanowi pośredni metabolit w syntezie kortyzolu i niektórych innych hormonów nadnerczowych, jak androgeny i estrogeny. Jest produkowany głównie w nadnerczach, a także w jajnikach u kobiet i w jądrach u mężczyzn.

Proces jego produkcji jest złożony i obejmuje szereg enzymatycznych przemian biochemicznych począwszy od cholesterolu aż do formowania aktywnych hormonów steroidowych.

Badanie poziomu 17-hydroksyprogesteronu można zlecić w wielu sytuacjach:

• Diagnostyka i monitorowanie zaburzeń nadnerczy, takich jak nietypowa forma wrodzonego przerostu nadnerczy (congenital adrenal hyperplasia – CAH), która może manifestować się nadmiernym owłosieniem, trądzikiem czy problemami z płodnością.
• Ocena przypadków przedwczesnego lub opóźnionego dojrzewania.
• Badanie kobiecych zaburzeń miesiączkowania i podejrzenia syndromu policystycznych jajników (PCOS).
• Wsparcie w diagnostyce niepłodności u mężczyzn i kobiet.
• Ocena funkcji nadnerczy przed rozpoczęciem niektórych rodzajów terapii hormonalnych.

W celu uzyskania jak najdokładniejszych wyników badania:

• Zaleca się bycie na czczo, najlepiej nie spożywać pokarmów przez około 8 godzin przed badaniem; można pić wodę.
• Należy unikać intensywnego wysiłku fizycznego oraz ograniczyć stres w dniu poprzedzającym wykonywanie badania.
• Zaleceniem lekarza bywa, aby kobiety wykonały badanie w określonym dniu cyklu menstruacyjnego, najczęściej w trakcie fazy folikularnej.
• Ważne jest przekazanie informacji personelowi medycznemu o przyjmowanych lekach i suplementach.

Wartości referencyjne poziomu 17-hydroksyprogesteronu różnią się w zależności od laboratorium, płci, wieku oraz faz cyklu menstruacyjnego u kobiet. Przykładowe zakresy referencyjne poniżej:

Dorosłe kobiety:

• faza pęcherzykowa 0,2 – 1,3 ng/ml
• faza lutealna 1,0 – 4,5 ng/ml
• menopauza 0,2 – 0,9 ng/ml

Dorośli mężczyźni 0,2 – 2,3 ng/ml

Podwyższone poziomy 17-OHP mogą wskazywać na wrodzony przerost nadnerczy, szczególnie jeśli towarzyszą im kliniczne objawy wymagające leczenia, takie jak wczesne oznaki dojrzewania, powiększenie narządów płciowych, czy poważniejsze zmiany metaboliczne. Jest to szczególnie ważne w diagnostyce noworodków i małych dzieci z podejrzeniem CAH.

Wzrost 17-OHP może także być obserwowany w innych stanach, takich jak PCOS (zespoły policystycznych jajników) czy nowotwory nadnerczy. W takich przypadkach konieczna jest dalsza diagnostyka i interpretacja wyników w kontekście dodatkowych badań.

Wartości 17-OHP bliskie dolnej granicy normy zwykle nie budzą niepokoju, ale mogą być ważne do interpretacji w kontekście obserwowanych objawów klinicznych pacjenta.

Jeśli wyniki 17-OHP są nieprawidłowe, mogą być wskazane dodatkowe badania, takie jak:

• Pomiar poziomów innych hormonów sterydowych, takich jak kortyzol, aby zrozumieć działanie nadnerczy w szerszym kontekście.
• Badanie profilu androgenów w tym testosteronu.
• Badania genetyczne, szczególnie jeśli podejrzewa się wrodzony przerost nadnerczy spowodowany zaburzeniami enzymatycznymi.
• Testy stymulacyjne ACTH mogą zostać przeprowadzone, aby ocenić zdolność nadnerczy do odpowiedzi na bodźce i produkcji hormonów.